Es la galería italiana más ilustre y una de las más destacadas en el mundo. Ofrece un panorama de las diversas escuelas de la pintura Florentina, a través de auténticas obras de arte. Comprende colecciones de la escuela italiana (en particular de la Véneta), un núcleo precioso de escuela flamenca, artistas alemanes y holandeses como: Dorer, Rembrandt, Rubens y una célebre colección de autorretratos. Completan estas obras las esculturas antiguas y una colección de tapices.

Fue la famiglia Medici la que encargó a Giorgio Vasari, la construcción del Palazzo degli Uffizi que era destinado a oficinas administrativas y judiciales (de allí proviene su nombre). Los trabajos iniciaron en el 1560 y se finalizaron 20 años más tarde. El edificio alberga también el Archivo de Estado con curiosos documentos de la historia de la ciudad. En la planta baja, se pueden observar los restos de la iglesia románica de San Pietro Scheraggio con frescos de Andrea del Castagno. En el primer piso, se pueden apreciar dibujos y grabados en el (Gabinetto dei Disegni e delle Stampe).